薄膜过滤法在内镜清洗消毒效果监测中是一种重要且有效的微生物检测手段,其应用过程及要点如下:
一、原理
薄膜过滤法是利用微孔滤膜拦截水样中的微生物,将微生物截留在滤膜上,再将滤膜置于适宜的培养基上培养,通过计数生长的菌落数来评估水样中微生物的含量,进而判断内镜清洗消毒的效果。如果清洗消毒彻底,水样中的微生物数量应极少或没有;若微生物数量超标,则说明清洗消毒可能存在问题。
二、应用步骤
采样准备
准备好无菌的采样瓶、微孔滤膜(一般孔径为 0.45μm)、过滤装置、无菌镊子、培养基等。
确保所有器具都经过严格灭菌处理,以避免外界微生物污染影响检测结果。
采样
在内镜清洗消毒后,使用无菌采样瓶从内镜的各腔道或冲洗用水中采集一定量的水样。例如,对于胃镜,可从其活检通道、吸引通道等分别采集水样,以保证全面评估内镜的清洗消毒效果。
采样量应根据相关标准和实际情况确定,一般不少于 100mL。
过滤
将微孔滤膜安装在内镜微生物检测仪过滤装置上,确保滤膜与过滤装置之间密封良好,防止水样泄漏。
将采集的水样缓慢倒入过滤装置中,开启真空泵或利用其他压力源,使水样通过滤膜,微生物则被截留在滤膜上。
过滤完成后,用少量无菌水冲洗过滤装置,以去除滤膜上可能残留的非微生物物质,但要注意冲洗水量不宜过多,以免冲走滤膜上的微生物。
培养
用无菌镊子小心地将滤膜从过滤装置上取下,平放在预先准备好的适宜培养基上。培养基的选择应根据可能存在的微生物种类来确定,例如,对于一般细菌检测,可使用营养琼脂培养基;若要检测特定致病菌,如结核分枝杆菌,则需使用相应的选择性培养基。
将含有滤膜的培养基置于适宜的温度和环境下培养,一般细菌培养温度为 35 - 37℃,培养时间为 24 - 48 小时;某些特殊微生物可能需要更长时间的培养。
计数与结果判定
培养结束后,观察培养基上生长的菌落数。使用计数器或肉眼直接计数滤膜上的菌落,记录每个滤膜上的菌落数量。
根据相关标准和规定,判定内镜清洗消毒效果是否合格。例如,若规定每 100mL 水样中细菌总数不得超过一定数值(如 20CFU),当检测结果超过该数值时,则判定内镜清洗消毒不合格,需要重新进行清洗消毒处理,并查找原因,采取改进措施。
三、优点
灵敏度高:能够检测出水样中含量极低的微生物,对于评估内镜清洗消毒效果具有较高的准确性。即使内镜清洗消毒后残留的微生物数量很少,也可能通过薄膜过滤法被检测出来。
操作相对简便:与其他一些复杂的微生物检测方法相比,薄膜过滤法的操作步骤相对较为简单,易于在医疗机构等场所开展。
可同时检测多种微生物:通过选择合适的培养基,可以在一次检测中同时检测出多种不同类型的微生物,全面评估内镜清洗消毒后的微生物污染情况。
四、注意事项
无菌操作:在整个采样、过滤、培养等过程中,必须严格遵守无菌操作原则,防止外界微生物污染水样和滤膜,影响检测结果的准确性。
滤膜质量:选择质量合格的微孔滤膜,确保其孔径均匀、无破损,以保证过滤效果和微生物的截留率。
培养条件控制:严格按照不同微生物的生长要求控制培养温度、湿度、气体环境等条件,确保微生物能够正常生长繁殖,以便准确计数。
重复检测:为了减少检测误差,提高结果的可靠性,建议对同一水样进行多次重复检测,取平均值作为最终结果。