一文详细了解微生物限度检查计数方法

　　微生物限度检查计数方法有哪些，一文详细为您介绍。

　　1、基本计数方法

　　计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。用稀释液稀释成1 : 10、1:100、1:1000 等稀释级的供试液。

　　(1)平皿法

　　1)常规法:

　　取经验证的低稀释级的供试液lml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15~ 20ml温度不超过45 °C的融化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

　　2)培养基稀释法:取经验证的低稀释级的供试液lml，等量分注于2个(2.皿法，每皿0.5ml)、5个(5皿法，每IL.O.2ml)或10个(10皿法，每M0.1ml)直径90mm的无菌平皿中，其它同上。

　　阴性对照试验取试验用的稀释液lml,置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。

　　2、薄膜过滤法

　　采用薄膜过滤法，一般采用微生物限度检测仪滤膜孔径应不大于0.45um,直径一般为50mm ，若采用其他直径的滤膜.冲洗量应进行相应的调整。

　　选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。

　　水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。

　　为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。

　　供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。总冲洗量不得超过1000ml,，以避免滤膜上的微生物受损伤。

　　取相当于每张滤膜含lg、lml或10ccm2供试品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。若供试品每1g、lml 或10 cm2所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液lml进行试验。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。

　　冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备:张滤膜。

　　阴性对照试验：取试验用的稀释液1ml,照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。

　　(2)培养和计数

　　培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过100cfu。