纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法的操作流程

       纯化水微生物限度检查是确保水质安全的重要步骤，主要目的是确定水中微生物的数量和种类，以评估其是否符合相关标准和要求。下面小编就来介绍下纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法的操作流程。

　　纯化水微生物限度检查所需设备

　　（1）微生物限度检测仪和培养箱、净化工作台。

　　（2）无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4. 0g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。

　　纯化水微生物限度检查分析步骤：

　　微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。细菌及控制菌培养温度为30～35℃;霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。

　　细菌、霉菌及酵母菌计数

　　A 供试品检查——薄膜过滤法

　　采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45µm，直径一般为50mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。总冲洗量不得超过1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。 取相当于每张滤膜含1ml的供试液，加至适量的稀释剂中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。

　　B 阴性对照试验 取验用的稀释液1ml，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。

　　C 培养和计数

　　除另有规定外，细菌培养3天，霉菌、酵母菌培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。 一般营养琼脂培养基用于细菌计数;玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数;酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。 细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。

需要注意的是，在微生物检测过程中，一些因素可能会影响检测结果的准确性。例如，缺氧、污染源、物种种类等因素都可能影响样品的真实性。因此，在检测过程中要严格控制这些因素，确保检测结果的准确性。

总之，纯化水微生物限度检测是确保水质安全的重要措施。通过遵循严格的检测标准和操作程序，可以有效地保证纯化水的质量，从而保障其在各个领域的安全使用。