食品中脂肪酸测定 —— 脂肪皂化与脂肪酸甲酯化操作步骤

一、试剂与材料准备

1. 2% 氢氧化钠甲醇溶液

2. 15% 三氟化硼甲醇溶液

3. 正庚烷（色谱纯）

4. 饱和氯化钠水溶液

5. 无水硫酸钠（经高温烘烤除水）

6. 脂肪提取物（从食品中提取的油脂样品）

二、仪器设备

1. 圆底烧瓶

2. 回流冷凝器

3. 恒温水浴锅（可控温 80 ℃±1 ℃）

4. 分液漏斗

5. 25 mL 具塞试管

6. 气相色谱进样瓶

三、操作步骤

1. 皂化反应

• 称取适量脂肪提取物置于圆底烧瓶中，准确加入 8 mL 2% 氢氧化钠甲醇溶液。

• 将圆底烧瓶与回流冷凝器连接紧密，置于 80 ℃±1 ℃ 恒温水浴锅中加热回流，直至烧瓶内油滴完全消失，停止皂化。

2. 甲酯化反应

• 从回流冷凝器上端缓慢加入 7 mL 15% 三氟化硼甲醇溶液，确保溶液全部流入圆底烧瓶。

• 继续保持 80 ℃±1 ℃ 水浴回流 2 min，完成脂肪酸的甲酯化。

3. 冷却与萃取

• 用少量蒸馏水自上而下冲洗回流冷凝器内壁，使附着的溶液流入圆底烧瓶。

• 取下圆底烧瓶，迅速置于室温环境中冷却至室温。

• 向烧瓶中准确加入 10 mL~30 mL 正庚烷，塞紧瓶塞后剧烈振摇 2 min，使甲酯化产物充分溶解于正庚烷中。

• 向烧瓶中加入适量饱和氯化钠水溶液，轻轻摇匀后静置，待溶液分层完全。

4. 脱水净化

• 用移液管吸取上层正庚烷萃取液约 5 mL，转移至 25 mL 具塞试管中。

• 向试管中加入 3 g~5 g 无水硫酸钠，塞紧塞子后振摇 1 min，使萃取液中的水分被充分吸附。

• 静置 5 min，待无水硫酸钠沉降完全。

5. 待测液制备

• 吸取上层澄清的正庚烷溶液，转移至气相色谱进样瓶中，密封保存，待气相色谱分析。