中药提取物微生物限度检查操作规范

　　中药提取物微生物限度检查操作规范如下：

　　一、实验前准备

　　了解药品性质：明确中药提取物的成分、剂型、用途等信息，以便选择合适的检查方法和实验条件。

　　准备实验器材和试剂：

　　仪器设备：包括微生物限度检测仪、培养皿、培养基、显微镜、天平、无菌棉签、无菌水等。

　　培养基：根据检查项目选择合适的培养基，如营养琼脂培养基(用于需氧菌总数检查)、玫瑰红钠琼脂培养基(用于霉菌和酵母菌总数检查)、麦康凯琼脂培养基(用于大肠埃希菌检查)等。

　　稀释剂：如0.9%无菌氯化钠溶液，用于制备供试液。

　　确认实验环境：

　　微生物限度检查应在洁净度不低于万级的环境下进行，局部操作区域洁净度需达到百级。

　　实验室应定期进行洁净度监测，确保符合规定要求。

　　人员培训：实验人员需经过专业培训，熟悉实验操作流程和注意事项，具备正确的操作技能。

　　二、采样与供试液制备

　　采样：

　　根据中药提取物的生产和使用环节，制定合理的采样方案。

　　使用无菌的采样工具和容器，确保样品在采集过程中不受污染。

　　记录采样的时间、地点、样品信息等。

　　供试液制备：

　　称取一定量的中药提取物(一般取10g作为检测样本)，加入适量的稀释剂(如0.9%无菌氯化钠溶液)，按照1:10的比例稀释。

　　充分振荡混合，使微生物从提取物上洗脱下来，制备成供试液。

　　供试液从制备到加入检验用培养基不得超过1小时，制备时若需加温应加热均匀且温度不得超过45℃。

　　三、实验操作流程

　　培养基准备：

　　根据实验要求，配制适量的培养基，并确保其质量和适用性。

　　对培养基进行质量把控，如营养琼脂培养基的pH值应控制在7.2-7.4之间。

　　接种与培养：

　　需氧菌总数检查：取供试液1ml，倾注平板法接种于营养琼脂培养基上，凝固后倒置培养于35℃±2℃的恒温培养箱中，培养48小时±2小时。

　　霉菌和酵母菌总数检查：取供试液1ml，倾注平板法接种于玫瑰红钠琼脂培养基上，凝固后倒置培养于23-28℃的恒温培养箱中，培养5天。

　　控制菌检查：如大肠埃希菌检查，取供试液接种于麦康凯琼脂培养基上，培养于35-37℃的恒温培养箱中，培养18-24小时。

　　观察与计数：

　　在规定的培养时间内，观察实验结果，包括菌落形态、数量、颜色等指标。

　　使用菌落计数器或显微镜进行细菌和霉菌的鉴别与计数。

　　每一个平板上的菌落数应在30-300之间为有效计数范围，超出此范围的结果可能不准确，需重新检测。

　　四、结果判定与报告

　　结果判定标准：

　　根据《中国药典》等标准规定，制定相应的微生物限度判定标准。

　　例如，需氧菌总数应不超过一定限度(如1000CFU/g)，霉菌和酵母菌总数应不超过一定限度(如100CFU/g)，控制菌如大肠埃希菌、沙门菌等不得检出。

　　结果报告：

　　将实验结果进行整理和分析，撰写报告并提交给相关部门或人员。

　　报告内容应包括实验名称、样品信息、实验操作步骤、观察结果、判定结果等关键信息。

　　五、实验后处理

　　实验废弃物处理：

　　对用过的培养基、带菌的样本等实验废弃物进行妥善处理。

　　例如，经高压蒸汽灭菌处理(一般为121℃、15-20分钟)，防止微生物扩散造成污染。

　　实验器材清洗与灭菌：

　　对使用过的玻璃器皿如培养皿、吸管等进行严格的清洗和灭菌处理。

　　一般采用干热灭菌法(在160-170℃下灭菌2小时)或高压蒸汽灭菌法(121℃灭菌30分钟)。